fa معتبرسازی روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC ) جهت شناسایی و تعیین مقدار لیزینوآلانین در شیر خشک نوزادان صنايع غذايي Food Science پژوهشي Research <p dir="RTL"><a name="OLE_LINK16">سابقه و هدف:</a> لیزینوآلانین طی تهیه و فرآوری شیر خشک&nbsp; در اثر حرارت، <span dir="LTR">pH</span> قلیایی با واکنش حذفی بتا، تشکیل دهیدروآلانین و واکنش با ترکیبات آمین دار ایجاد می‌گردد. در این مطالعه طراحی و معتبر سازی روشی مناسب جهت شناسایی و تعیین مقدار لیزینوآلانین در شیر خشک نوزادان&nbsp; با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (<span dir="LTR">HPLC</span>) مد نظر قرار گرفت.</p> <p dir="RTL">مواد و روش<span dir="LTR">‌</span>ها: در این پژوهش ابتدا شرایط بهینه <span dir="LTR">HPLC</span>&nbsp; (ستون <span dir="LTR">C18</span>، آشکارساز فلورسانس، مشتق سازی توسط دنسیل کلراید، سرعت جریان فاز متحرک <span dir="LTR">ml/min</span>&nbsp; 9/0، شویش گرادیانت و فاز متحرک شامل بافر فسفات&nbsp; 7=<span dir="LTR">pH</span>&nbsp; و استونیتریل) تعیین شد. بر اساس شرایط فوق روش معتبر سازی گردید و کارآمدی روش معتبر شده با آنالیز 10 نمونه شیر خشک بررسی شد.</p> <p dir="RTL">یافته<span dir="LTR">‌</span>ها<span dir="LTR">‌</span>: نمودار کالیبراسیون در محدوده غلظتی 80- 5&nbsp; میلی‌گرم بر لیتر، خطی بود. ضریب همبستگی 9949/0= <span dir="LTR">R2</span> به دست آمد. حد تشخیص (<span dir="LTR">Limit of Detection</span>) <span dir="LTR">mg/L</span>2 و حد تعیین مقدار (<span dir="LTR">Limit of Quantification</span>)<span dir="LTR">mg/L</span> 5 و درصد بازیافت (<span dir="LTR">Recovery</span>) 8/87 _ 7/83 درصد به دست آمد. در ارزیابی دقت روش، انحراف استاندارد نسبی (<span dir="LTR">RSD%</span>) سطح منحنی و غلظت به دست آمده محاسبه شد. برای <span dir="LTR">Intra day</span> به ترتیب کمتر از 87/3 و &nbsp;7/2 درصد و برای <span dir="LTR">Inter day</span>&nbsp; به ترتیب کمتر از 2/5 و 4/7 درصد به دست آمد. در 7 مورد از شیرهای آنالیز شده، لیزینوآلانین شناسایی نشد و در 3 نمونه مقدار آن بین<span dir="LTR">LOD, LOQ </span>&nbsp;به دست آمد.</p> <p dir="RTL">نتیجه گیری: این روش در جهت تشخیص و شناسایی لیزینوآلانین در شیرخشک نوزادان از دقت، صحت و کارایی لازم برخوردار بوده و در دسترس و مقرون به صرفه می‌باشد.</p> <p><span dir="RTL">واژگان کلیدی:</span> <span dir="RTL">لیزینوآلانین، شیر خشک نوزادان، کروماتوگرافی مایع باکارایی بالا، آشکارساز فلورسانس، معتبرسازی</span></p> <p><strong>Background and Objectives: </strong><em>Lysinoalanine</em> (LAL) is created in the course of preparation of infant formula during the heat processing, alkaline pH, b elimination, dehydroalanine production and reaction with amines group. Produced LAL not only results in losses of necessary amino acids&rsquo; content, but also could cause nephrotoxic effects. So the formulated infant formula must be free from LAL. In this study, HPLC for detection and determination of LAL was developed and validated.</p> <p><strong>Materials and Methods: </strong>HPLC conditions were optimized (C18 Column, Fluorescence detector, Column temperature 30℃, flow rate 0.9 ml/min. Mobile phase consisted of mixed phosphate buffer, pH: 7, acetonitrile and pure acetonitrile in gradient elution), and LAL was dansylated by adding dansyl chloride. The method was validated according to the above conditions. 10 infant formula brands were analyzed according to the validated method.</p> <ul> <li>The calibration curve for concentration versus LAL peak area (R²= 0.9949) was linear in the range of 5_80 mg/L. LOD and LOQ were 2 and 5 mg/L respectively, and the accuracy result (recovery range) was within 83.6-87.7%. Assessment of precision showed that the relative standard deviation (RSD%) of concentration&nbsp; and area peak of spike samples in the intra-day study &nbsp;were less than 2.7%&nbsp; and 3.8% respectively, and in inter-day study were less than 7.4% and 5.2%, respectively. In the analyzed infant formula in seven samples, LAL was not detectable, and it was detected between LOD and LOQ only in three samples.</li> </ul> <p><strong>Conclusion: </strong>This method is a valuable validated way, available, reliable and cost benefit in LAL detection and determination in infant formula.</p> <p style="margin-left:2.85pt;"><strong>Keywords</strong>: Lysinoalanine, Infant formula, HPLC, Fluorescence detector</p> لیزینوآلانین, شیر خشک نوزادان, کروماتوگرافی مایع باکارایی بالا, آشکارساز فلورسانس, معتبرسازی. Lysinoalanine, Infant formula, HPLC, Fluorescence detector 137 146 http://nsft.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-547-1&slc_lang=fa&sid=1 G Karami گلناز کرمی GOLNAZ.KARAMI@OUTLOOK.COM 11500319475328460013371 11500319475328460013371 No FDCL مرکز آزمایشگاه های کنترل غذا و دارو M Shekarchi مریم شکرچی SHEKARCHIM@YAHOO.COM 11500319475328460013372 11500319475328460013372 No FDLRC مرکز تحقیقات آزمایشگاهی غذا و دارو R Khosrokhavar رویا خسروخاور khosrokhavar_r@yahoo.com 11500319475328460013373 11500319475328460013373 Yes FDLRC مرکز تحقیقات آزمایشگاهی غذا و دارو